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          影響ELISA試劑盒測定成果的原因和解決辦法

          發布時間: 2022-04-02  點擊次數: 137次

          影響ELISA試劑盒測定成果的原因和解決辦法

          ELISA試劑盒方法被廣泛應用于各種抗原和抗體測定,具有靈敏度高,操作簡略等優點,但是在詳細實驗過程中影響要素較多,而且要按照嚴厲的闡明要求,在臨床檢驗中除正常反響外,有時??梢姷揭恍╁e誤成果(即假陽性或假陰性成果)。
          影響ELISA測定錯誤成果的原因主要有:
          標本要素;
          試劑要素;
          操作要素。
          一、類風濕因子
          人血清中IgM、IgG型類風濕因子(RF)能夠與ELISA系統中的捕獲抗體及酶符號二抗的FC段直接結合,然后導致假陽性。
          解決辦法:
          1.Fab2替代完好的IgG;
          2.標本用聯有熱變性(63℃,10 minIgG的固相吸附劑處理(將熱變性IgG加入到標本稀釋液中同樣有用);
          3.檢測抗原時,能夠用2-巰基yi醇等加入到標本稀釋液中,使RF降解。
          二、補體
          ELISA系統中固相一抗和符號二抗過程中,抗體分子發作變構,其FC段的補體C1q分子結合位點被暴露出來,使C1q 能夠將二者連接起來,然后形成假陽性。
          解決辦法:
          1.EDTA稀釋標本;
          2.53℃,10 min56℃,30 min加熱血清使C1q滅活。
          三、嗜異性抗體
          人類血清中含有能與嚙齒類動物(如鼠等)Igs) 結合的天然嗜異性抗體,可將ELISA系統中一抗和二抗連接起來,也能形成假陽性。
          解決辦法:
          可在標本稀釋液中加入過量的動物Igs),但加入量不足或亞類不同時無效。
          四、嗜靶抗原的本身抗體
          抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的本身抗體,有時能與靶抗原結合形成復合物,在ELISA方法中均可干擾抗原抗體測定成果。
          解決辦法:
          測定前需用理化方法將其解離后再測定。

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